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       大鼠ELISA試劑盒每次試驗均應同時使用陰性對照血清，可選擇強陽性的血清作為標準對照血清，并可自己設定其為00單位（免疫酶單位-EIU）。這樣每次試驗均參考陽性血清結果確定每份血清的相對抗體水平，其計算公式如下：標本值-陰性對照值  陽性對照值-陰性對照值有此測定（如間接法ELISA試劑盒）需用稀釋的血清，可在試管中按規定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液，再在其中加入血清標本，然后在微型震蕩器上震蕩分鐘以保證混和。加酶結合物應用液和底物應用液時可用定量多道加液器，在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應，即加標本和加酶結合物后。

       如果國內或上的標準抗體和檢測方法，那么所用的參考血清應與標準血清對照實驗進行標準化，但如果所用的檢測方法不同，標準化時就存在差別，不同的方法ELISA試劑盒檢測出的結果不能反映出參考血清和標準血清之間的差別。無特異抗體的血清稀釋陽性血清繪制標準曲線，選擇的稀釋度應很容易區別陽性。

      抗原抗體反應的完成需要有一定的溫度和時間，這一保溫過程稱為溫育(incubation)，有人稱之為孵育，在ELISA試劑盒中似不恰當。